ГОСТ 28560-90

Группа Н09

     

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

     

ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ

     
Метод выявления бактерий родов Proteus, Morganella, Providencia

     
Food products. Method for detection of bacteria of Proteus, Morganella, Providencia genera

МКС 07.100.30

ОКСТУ 9109

Дата введения 1991-07-01

ИНФОРМАЦИОННЫЕ ДАННЫЕ

1. РАЗРАБОТАН И ВНЕСЕН Всесоюзным научно-исследовательским институтом консервной и овощесушильной промышленности

2. УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Государственного комитета СССР по управлению качеством продукции и стандартам от 24.05.90 N 1277

3. ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

4. ССЫЛОЧНЫЕ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ

5. Ограничение срока действия снято по протоколу N 5-94 Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации (ИУС 11-12-94)

6. ПЕРЕИЗДАНИЕ. Апрель 2010 г.

Настоящий стандарт распространяется на пищевые продукты и устанавливает метод выявления бактерий родов Proteus, Morganella, Providencia.

Метод основан на высеве определенного количества продукта или его разведений в жидкую селективную среду, культивировании посевов при (36±1) °С в течение 48 ч, последующем пересеве выросших культур на плотные дифференциально-диагностические среды, культивировании посевов при (36±1) °С в течение 48 ч, выделении характерных колоний и подтверждении с помощью биохимических тестов их принадлежности к бактериям родов Proteus и (или) Morganella и (или) Providencia или к видам Proteus vulgaris или Proteus mirabilis.

1. ОТБОР И ПОДГОТОВКА ПРОБ

Отбор проб - по ГОСТ 26668, подготовка к испытанию - по ГОСТ 26669.

2. АППАРАТУРА, МАТЕРИАЛЫ И РЕАКТИВЫ

Для проведения испытания применяют аппаратуру, материалы и реактивы по ГОСТ 10444.1 со следующими дополнениями:

весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104*, с наибольшим пределом взвешивания до 200 г и пределом допускаемой погрешности ±2 мг (для взвешивания реактивов);

________________

* С 1 июля 2002 г. введен в действие ГОСТ 24104-2001. На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 53228-2008.

весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104, с наибольшим пределом взвешивания до 1 кг и пределом допускаемой погрешности ±10 мг (для взвешивания продукта);

микроскоп световой биологический или импортный с аналогичными техническими характеристиками;

термостат с диапазоном рабочих температур от 28 до 55 °С, позволяющий поддерживать заданную температуру с погрешностью ±1 °С;

холодильник бытовой;

стерилизатор горячим воздухом;

адонит;

мальтоза;

метил бутанол (амиловый спирт);

мочевина;

нейтральный красный;

натрия дезоксихолат;

натрия тиосульфат (NaSO5HO);

натрий аммония фосфат;

полимиксин В сульфат во флаконах по 25 мг (250000 ЕД) и по 50 мг (500000 ЕД);

полимиксин М сульфат во флаконах по 500000 ЕД;

L- или DL-фенилаланин;

L- или DL-орнитин;

феноловый красный;

желчь сухая или желчь натуральная крупного рогатого скота;

железа (III) цитрат;

железо хлорное (FeCl6HO)

3. ПОДГОТОВКА К ИСПЫТАНИЮ

    3.1. Приготовление растворов

3.1.1. Спиртовой раствор массовой концентрацией бромтимолового синего 16 г/дм: 1,6 г бромтимолового синего переносят в мерную колбу вместимостью 100 см и растворяют в этиловом спирте с массовой долей 96%. Раствор доливают этиловым спиртом до метки.

3.1.2. Раствор массовой концентрацией мочевины 500 г/дм: 50 г мочевины переносят в мерную колбу вместимостью 100 см, растворяют в дистиллированной воде, раствор доливают до метки.

3.1.3. Щелочной раствор фенолового красного массовой концентрацией 16 г/дм: 1,6 г фенолового красного растворяют в мерной колбе вместимостью 100 см в растворе гидроксида натрия массовой концентрацией 100 г/дм. Раствор доливают раствором гидроксида натрия до метки.

3.1.4. Раствор хлорного железа массовой концентрацией 100 г/дм: 16,6 г (FeCl6HO) переносят в мерную колбу вместимостью 100 см, растворяют в дистиллированной воде. Раствор доливают до метки.

3.1.5. Раствор гидроксида натрия массовой концентрацией 100 г/дм: 10 г гидроксида натрия переносят в мерную колбу вместимостью 100 см, растворяют в дистиллированной воде. Раствор доливают до метки.

3.1.6. Раствор кристаллического фиолетового массовой концентрацией 1 г/дм: 0,1 г кристаллического фиолетового переносят в мерную колбу вместимостью 100 см, растворяют в дистиллированной воде. Раствор доливают до метки.

3.1.7. Раствор для среды агара-дезоксихолат-цитрат лактозного: 17,0 г натрия лимоннокислого, 1,0 г натрия тиосульфата, 2,0 г железа (III) цитрата помещают в мерную колбу вместимостью 100 см, растворяют в дистиллированной воде. Раствор доводят до метки и выдерживают на водяной бане при (60±1) °С в течение 1 ч. Раствор хранят при комнатной температуре не более 3 мес.

3.1.8. Раствор дезоксихолата натрия массовой концентрацией 100 г/дм: 10 г дезоксихолата натрия переносят в мерную колбу вместимостью 100 см, растворяют в дистиллированной воде. Раствор доливают до метки и выдерживают на водяной бане при (60±1) °С в течение 1 ч. Раствор хранят при комнатной температуре не более 6 мес.

3.1.9. Растворы полимиксин В сульфата или полимиксин М сульфата готовят непосредственно перед использованием, для этого во флакон со стерильным антибиотиком вносят 5 или 10 см стерильной дистиллированной воды.

3.1.10. Реактивы для определения индола:

Реактив Ковача: 5,0 г парадиметиламинобензальдегида растворяют в 75 см метил бутанола и добавляют 25 см концентрированной соляной кислоты (=1,18-1,19 г/см).

Реактив Эрлиха: 4,0 г парадиметиламинобензальдегида растворяют в 380 см этилового спирта с массовой долей 96% и добавляют 80 см концентрированной соляной кислоты (=1,18-1,19 г/см).

Реактивы хранят в сосудах из темного стекла при температуре (4±2) °C не более 1 мес.

3.1.11. Вазелиновое масло готовят по ГОСТ 10444.1.

3.1.12. Спиртовой раствор массовой концентрацией бромкрезолового пурпурного 10 г/дм: 1 г бромкрезолового пурпурного переносят в мерную колбу вместимостью 100 см и растворяют в этиловом спирте с массовой долей 96%. Раствор доливают этиловым спиртом до метки.

3.2. Приготовление питательных сред

3.2.1. Агар мясо-пептонный готовят по ГОСТ 10444.1.

3.2.2. Бульон мясо-пептонный готовят по ГОСТ 10444.1.

3.2.3. Среда жидкая селективная. Основа среды: к 1 дм мясо-пептонного бульона по п.3.2.2 добавляют 1,0 г маннита, 50,0 смнатуральной бычьей желчи или эквивалентное количество сухой желчи, 0,8 г калия фосфорнокислого двузамещенного, 2,0 см раствора кристаллического фиолетового, приготовленного по п.3.1.6, 2,0 см спиртового раствора бромтимолового синего, приготовленного по п.3.1.1. Устанавливают рН таким образом, чтобы после стерилизации он составлял (6,9±0,1) при 25 °С. Стерилизуют текучим паром при 100 °С в течение 15 мин.

Для приготовления среды к основе добавляют асептически 10,0 см раствора мочевины, приготовленного по п.3.1.2, и 100000 ЕД полимиксина В сульфата или 120000 ЕД полимиксина М сульфата. Среду разливают в стерильные пробирки по 5 см. Хранят при (4±2) °С не более 7 сут. Готовая среда прозрачная, желто-бурого цвета.

3.2.4. Агар дезоксихолат-цитрат лактозный по Leifson модификация Hynes.

Основа среды: в 1 дм кипящей мясной воды, приготовленной по ГОСТ 10444.1, растворяют 5,0 г пептона, 10,0 г лактозы, 22,5 г агара, охлаждают до (45-50) °С, устанавливают рН таким образом, чтобы при 25 °С он составлял (7,4±0,1). Прибавляют 0,03 г нейтрального красного, разливают в мерные колбы, стерилизуют при (115±1) °С в течение 20 мин. Хранят при (4±2) °С не более 7 сут.

Допускается использовать вместо 1 дм мясной воды и 5,0 г пептона 1 дм мясо-пептонного бульона, приготовленного по п.3.2.2.