ГОСТ Р 53193-2008 Напитки алкогольные и безалкогольные. Определение кофеина, аскорбиновой кислоты и ее солей, консервантов и подсластителей методом капиллярного электрофореза (с Поправкой)

     8 Проведение испытаний

8.1 Подготовка проб

Если проба не содержит осадка или взвешенных частиц, то ее центрифугируют в течение 5 мин при частоте вращения 5000 мин, переносят в сухой чистый сосуд или пробирку типа Эппендорф и анализируют согласно 8.2.

Образцы газированных напитков предварительно дегазируют. Для этого порцию напитка не менее 50 см помещают в коническую колбу вместимостью 100 см и подключают к водоструйному насосу. Дегазируют в течение 10-15 мин. После дегазирования пробу центрифугируют, как описано выше, и направляют на анализ.

Пробы напитков, в которых определяют содержание аскорбиновой кислоты, вскрывают непосредственно перед проведением испытаний. Вскрытую пробу хранят не более 6 ч плотно закупоренной, не допуская попадания воздуха и прямых солнечных лучей.

Рекомендуется после вскрытия упаковки пробу законсервировать добавлением раствора трилона Б. Для этого в мерную колбу вместимостью 100 см пипеткой помещают 10 см раствора трилона Б (см. 7.2.5), затем пипеткой отбирают 50 см анализируемой пробы, помещают в эту же мерную колбу и доводят до метки дистиллированной водой. Тщательно перемешивают. Срок хранения законсервированной пробы в холодильнике при температуре (4±2) °С - не более 3 сут.

Если проба содержит осадок или взвешенные частицы, то ее гомогенизируют и отбирают две аликвоты. Каждую аликвоту центрифугируют в течение 5 мин при частоте вращения 5000 мин. Затем отбирают верхний надосадочный слой жидкости и переносят в сухой чистый сосуд или пробирку типа Эппендорф для дальнейшего анализа. Если такую пробу необходимо разбавить (см. 8.2) или законсервировать раствором трилона Б, то ее сначала тщательно перемешивают, затем отбирают аликвоту, переносят в соответствующую мерную колбу, доводят до метки дистиллированной водой и перемешивают. После этого разбавленную и/или законсервированную пробу центрифугируют 5 мин при частоте вращения 5000 мин, надосадочный слой переносят в сухой чистый сосуд или пробирку типа Эппендорф и анализируют согласно 8.2.

8.2 Проведение измерений

Регистрируют не менее двух электрофореграмм проб, подготовленных по 8.1. Проверяют правильность автоматической разметки пиков и проводят идентификацию компонентов в пробе по совпадению времен миграции компонентов в пробе и при построении градуировочной зависимости (ширина окна идентификации 5%).

При возникновении сомнений при идентификации компонентов рекомендуется использовать метод добавок. Увеличение высоты соответствующего пика подтверждает правильность идентификации. Добавка должна составлять от 50% до 150% от массовой концентрации компонента в пробе.

Если анализируемые компоненты обнаружены, то определяют их массовую концентрацию для каждой электрофореграммы с использованием градуировочной характеристики, установленной по 7.6.

Проверяют сходимость полученных значений массовой концентрации компонентов по формуле (3). Если условие (3) выполняется, то в качестве значения массовой концентрации соответствующего компонента в подготовленной пробе принимают среднеарифметическое полученных значений. Если условие не выполняется, проводят повторную регистрацию электрофореграмм после устранения причины нестабильности.

Если измеренные значения массовой концентрации одного или нескольких компонентов в пробе превышают верхние границы диапазонов градуировочной характеристики, то пробу разбавляют дистиллированной водой так, чтобы массовая концентрация компонентов в полученном растворе находилась в середине линейного диапазона измеряемых значений массовой концентрации, и повторяют регистрацию электрофореграмм.

Коэффициент разбавления пробы вычисляют по формуле

,                                                               (5)

где - объем разбавленной пробы, см;

- объем аликвотной порции пробы, взятой для разбавления, см.

Примеры электрофореграмм приведены в приложении А.

Примечание - На электрофореграммах некоторых проб могут наблюдаться дополнительные пики, принадлежащие, в частности, витаминам группы В (после пика кофеина), ванилину (после пика аскорбиновой кислоты) и синтетическим пищевым красителям (перед или после пика ацесульфама ). В случае неудовлетворительного разделения пиков аскорбиновой кислоты и ванилина (разрешение меньше 0,7) необходимо изменить условия анализа, установив температуру 45 °С, и построить градуировочную характеристику для аскорбиновой кислоты при этих условиях.