ГОСТ 32371-2013

     

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

МЕТОДЫ ИСПЫТАНИЯ ПО ВОЗДЕЙСТВИЮ ХИМИЧЕСКОЙ ПРОДУКЦИИ НА ОРГАНИЗМ ЧЕЛОВЕКА

Кожно-резорбтивное действие: метод in vivo

Methods of testing the chemicals of health hazard. Skin absorption: in vivo method

     

МКС 71.040.50

Дата введения 2014-08-01

Предисловие

Цели, основные принципы и общие правила проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены"

Сведения о стандарте

1 ПОДГОТОВЛЕН Федеральным бюджетным учреждением здравоохранения "Российский регистр потенциально опасных химических и биологических веществ" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФБУЗ "Российский регистр потенциально опасных химических и биологических веществ" Роспотребнадзора), Федеральным государственным унитарным предприятием "Всероссийский научно-исследовательский центр стандартизации, информации и сертификации сырья, материалов и веществ" (ФГУП "ВНИЦСМВ")

2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 14 ноября 2013 г. N 44)

За принятие проголосовали:

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 22 ноября 2013 г. N 775-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 32371-2013 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 августа 2014 г.

5 Настоящий стандарт идентичен международному документу OECD, Test N 427:2004* "Кожно-резорбтивное действие: метод in vivo" ("Skin Absorption: In Vivo Method", IDT).

________________

* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей. - Примечание изготовителя базы данных.

Наименование настоящего стандарта изменено относительно наименования указанного международного стандарта для приведения в соответствие с ГОСТ 1.5 (подраздел 3.6).

В настоящий стандарт внесено следующее редакционное изменение: раздел "Термины и определения" из приложения перенесен в текст стандарта (раздел 2) для удобства пользования

6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

7 ПЕРЕИЗДАНИЕ. Апрель 2019 г.

Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта и изменений к нему на территории указанных выше государств публикуется в указателях национальных стандартов, издаваемых в этих государствах, а также в сети Интернет на сайтах соответствующих национальных органов по стандартизации.

В случае пересмотра, изменения или отмены настоящего стандарта соответствующая информация будет опубликована на официальном интернет-сайте Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации в каталоге "Межгосударственные стандарты"

Введение

Многие химические вещества в производственных и бытовых условиях попадают на кожу и могут проникать через нее, в то время как в большинстве токсикологических исследований на лабораторных животных используется пероральный путь введения. Исследования абсорбции веществ через кожу в опытах in vivo позволяют установить связь между результатами исследований, полученными при пероральном введении и оценке безопасности воздействия на кожу.

Вещество должно проникнуть через большое число клеточных слоев кожи, прежде чем попадет в организм. Проникновение вещества в организм через кожу зависит от его липофильности и толщины внешнего слоя эпидермиса, а также от таких факторов, как молекулярная масса и концентрация вещества.

Кожа крыс и кроликов более проницаема, чем кожа человека, в то время как проницаемость кожи морских свинок, свиней и обезьян более близка к проницаемости кожи человека.

Методы для оценки способности химических веществ проникать через кожу делятся на две категории: in vivo и in vitro. В последнее время разработаны методы in vitro, которые описаны в Руководящих документах ОЭСР по изучению абсорбции кожи. Руководящий документ ОЭСР [2] позволяет выбрать наиболее подходящий метод: in vivo либо in vitro.

Метод in vivo позволяет получить полную информацию о кожно-резорбтивном действии с использованием различных лабораторных животных, а также определить степень проникновения исследуемого вещества через кожу в организм.

Преимуществом методов in vivo является то, что они используют физиологически и метаболически интактную систему, а также стандартные виды животных, для проведения испытаний по определению токсичности и могут быть модифицированы с учетом использования других видов.

Недостатками является использование теплокровных животных, необходимость применения радиоактивной метки для получения достоверных результатов, а также сложности в определении ранней фазы абсорбции и различия в проницаемости кожи предпочтительных видов лабораторных животных (крыс) и человека.

Главное правило проведения данного испытания в том, что едкие/коррозионные вещества не должны тестироваться на животных.

     1 Область применения

Настоящий стандарт устанавливает процедуру испытания кожно-резорбтивного действия химической продукции методом in vivo.

Исключением являются едкие/коррозионные вещества, которые не должны тестироваться на животных.

     2 Термины и определения

В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями:

2.1 исследуемое вещество: материал, чьи абсорбционные характеристики должны быть изучены. В идеальном случае, вещество должно быть с радиоактивной меткой.

2.2 непоглощенная доза (unabsorbed dose): вещество, смытое с поверхности кожи после экспозиции или присутствующее на негерметичной повязке, а также количество вещества, которое испарилось с кожи во время экспозиции.

2.3 поглощенная доза (in vivo) (absorbed dose): вещество, присутствующее в моче, смывах из клетки, экскрементах, выдыхаемом воздухе (в случае проведения замеров), крови, тканях (при сборе образцов) и остатках тела, после удаления кожи в месте нанесения вещества.

2.4 поглощаемая доза (in vivo) (the absorbable dose): вещество, присутствующее на или в коже после промывки.

2.5 продолжительность экспозиции: временной интервал между нанесением и удалением исследуемой пробы путем промывки кожи.    

     3 Принцип метода проведения испытаний

Исследуемое вещество, как правило, с радиоактивной меткой, наносят на подготовленный участок кожи животных одно- или многократно в репрезентативной для использования форме. Тестируемое вещество оставляют на поверхности кожи в течение определенного периода времени под соответствующей повязкой (негерметичной, полугерметичной и герметичной) для предотвращения слизывания вещества животными. По окончании времени экспозиции повязку удаляют, и кожу очищают подходящим моющим средством. Повязку и моющие средства сохраняют для анализа, и накладывают свежую повязку. До, во время и после экспозиции животных содержат в индивидуальных клетках (для исследования метаболизма), их выделения и выдыхаемый воздух собирают для анализа. Сбор выдыхаемого воздуха может не производиться, когда существует достаточно информации, что вещество содержится в выдыхаемом воздухе в небольшом количестве или образуется нелетучий радиоактивный метаболит. В каждом исследовании, как правило, используют несколько групп животных, которым наносится исследуемое вещество. Одну группу по окончании периода экспозиции умерщвляют. Другие группы животных умерщвляют в определенные временные интервалы после экспозиции. По окончании времени проведения наблюдений оставшихся животных умерщвляют, их кровь собирают для анализа, место нанесения пробы также удаляют для дальнейшего анализа, а остатки тела животного анализируют на наличие невыделенного вещества. Образцы анализируют соответствующими способами и оценивают степень перкутанной абсорбции.

     4 Описание метода проведения испытаний

4.1 Выбор экспериментальных видов

Наиболее часто используемым видом являются крысы, но могут использоваться безволосые группы животных и виды, имеющие скорость абсорбции вещества кожей близкую к скорости абсорбции человеческой кожей. Необходимо использовать молодые, взрослые, здоровые особи одного пола (по умолчанию мужские) обычно используемых лабораторных видов. На начальной стадии испытания различия в массе тела животных не должны превышать ±20% от средней массы.

Пример - Самцы крыс массой тела 200-250 г, предпочтительны с большей массой в данном диапазоне.

4.1.1 Количество и пол животных

Для каждого исследования и для каждого момента умерщвления должна использоваться группа, как минимум, из четырех животных одного пола. Каждую группу животных умерщвляют в различных временных интервалах.

Пример - По окончании периода экспозиции (6 или 24 ч) и последующие периоды (например, 48 и 72 ч).

Если существуют данные, демонстрирующие значительные различия в кожной токсичности у женских и мужских особей, для исследования должны быть выбраны животные наиболее чувствительного пола. Если таких данных не существует, тогда может использоваться любой пол.

4.1.2 Условия содержания и кормления

Температура в лабораторной комнате для животных должна составлять (22±3)°С.

Относительная влажность должна составлять как минимум 30% и не превышать 70%, за исключением времени уборки комнаты. Оптимальное значение относительной влажности составляет 50-60%. Освещение должно быть искусственным в последовательности 12 часов - свет, 12 часов - темнота. Громкие кратковременные шумы должны быть минимизированы. При кормлении может быть использована обычная лабораторная диета с неограниченным количеством питьевой воды. Во время испытания, а также во время адаптации, животные должны содержаться в индивидуальных клетках. Утечка воды или еды, которая может повлиять на результаты, должна быть минимизирована.

4.1.3 Подготовка животных

Животных помечают для индивидуальной идентификации и содержат в клетках в течение, как минимум, пяти дней до начала испытания для адаптации к лабораторным условиям.

Вслед за периодом адаптации, приблизительно за 24 ч до начала эксперимента, у каждого животного должен быть выстрижен участок кожи в области плеч и спины. Поскольку проницаемость поврежденной и неповрежденной кожи различна, необходимо избегать повреждений кожи. После того, как выстрижен участок кожи, приблизительно за 24 ч до нанесения исследуемого вещества, поверхность кожи должна быть обработана ацетоном для удаления кожного жира. Дополнительное мытье мылом и водой не рекомендуется, поскольку любые мыльные остатки могут стимулировать абсорбцию вещества. Область кожи должна быть достаточной для достоверного вычисления поглощенного количества исследуемого вещества на 1 см кожи, предпочтительно, как минимум, 10 см. Данная площадь используется для крыс массой 200-250 г. После обработки животных возвращают в клетки.

4.1.4 Подготовка исследуемого вещества

Проба исследуемого вещества (например, чистый, разбавленный или смешанный препарат, содержащий исследуемое вещество, который будет наноситься на кожу) должна быть такой же, какой человек или другие потенциальные целевые виды могут подвергаться в реальных условиях воздействия. Любые отклонения в составе исследуемой пробы должны быть обоснованы. При необходимости исследуемое вещество растворяют или суспендируют в подходящем растворителе. Для растворителей (в случае, если это не вода) должны быть известны абсорбционные характеристики и возможность потенциального взаимодействия с исследуемым веществом.

4.1.5 Нанесение исследуемого вещества

На поверхности кожи выбирают место определенной площади для нанесения исследуемого вещества. Известное количество исследуемого вещества равномерно наносят на выстриженный участок кожи. Количество нанесенного вещества должно соответствовать потенциальной экспозиции для человека, обычно 1-5 мг/см твердого вещества или до 10 мкл/см жидкости. Любые другие количества должны быть обоснованы ожидаемыми условиями использования, целью эксперимента или физическими характеристиками пробы. После нанесения вещества обработанное место должно быть защищено от слизывания. Пример типичного устройства приведен на рисунке.

А - фильтр из активированного угля или марлевая повязка; Б - насадка с резьбой; В - основа с резьбой; Г - кожа; Д - цианоакрилатный клей

Рисунок 1 - Пример стандартного устройства, используемого для ограничения и защиты места нанесения вещества во время исследований перкутанной абсорбции in vivo

Место нанесения защищается негерметичной повязкой (например, проницаемой нейлоновой марлевой повязкой).

При неограниченном числе нанесений вещества место нанесения должно герметично закрываться. В случае испарения полулетучего исследуемого вещества его уровень воздействия (проникновения) снижается в недопустимой степени, поэтому необходимо улавливать испаряющееся вещество угольными фильтрами, покрывающими устройство для нанесения вещества (рисунок).

Используемые приборы не должны повреждать кожу, поглощать или реагировать с исследуемой пробой.

После эксперимента животных возвращают в индивидуальные клетки для сбора выделений.

4.1.6 Продолжительность экспозиции и подготовки образцов