ГОСТ 32375-2013

     

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

МЕТОДЫ ИСПЫТАНИЯ ПО ВОЗДЕЙСТВИЮ ХИМИЧЕСКОЙ ПРОДУКЦИИ НА ОРГАНИЗМ ЧЕЛОВЕКА

Испытания по оценке кожной сенсибилизации

Testing of chemicals of human hazard. Skin sensitisation

МКС 71.100.01

Дата введения 2014-08-01

(Поправка).

Предисловие

Цели, основные принципы и общие правила проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены"

Сведения о стандарте

1 ПОДГОТОВЛЕН Федеральным бюджетным учреждением здравоохранения "Российский регистр потенциально опасных химических и биологических веществ" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФБУЗ "Российский регистр потенциально опасных химических и биологических веществ" Роспотребнадзора); Федеральным государственным унитарным предприятием "Всероссийский научно-исследовательский центр стандартизации, информации и сертификации сырья, материалов и веществ" (ФГУП "ВНИЦСМВ") на основе собственного перевода на русский язык англоязычной версии документа, указанного в пункте 4

2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 18 октября 2013 г. N 60-П)

За принятие проголосовали:

(Поправка. ИУС N 7-2019).

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 22 ноября 2013 г. N 806-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 32375-2013 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 августа 2014 г.

5 Настоящий стандарт идентичен международному документу OECD Test N 406* "Кожная сенсибилизация" ("Skin Sensitisation", IDT)

________________

* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей. - Примечание изготовителя базы данных.

6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

7 ИЗДАНИЕ (март 2019 г.) с Поправкой* (ИУС 4-2015)

_________________________

* См. ярлык "Примечания".     

Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта и изменений к нему на территории указанных выше государств публикуется в указателях национальных стандартов, издаваемых в этих государствах, а также в сети Интернет на сайтах соответствующих национальных органов по стандартизации.

В случае пересмотра, изменения или отмены настоящего стандарта соответствующая информация будет опубликована на официальном интернет-сайте Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации в каталоге "Межгосударственные стандарты"

ВНЕСЕНА поправка, опубликованная в ИУС N 7, 2019 год      

Поправка внесена изготовителем базы данных

Введение

Количественные зависимости "структура-активность" и методы in vitro развиты недостаточно для оценки способности вещества вызывать кожную сенсибилизацию и, следовательно, по-прежнему должны основываться на моделях in vivo.

Морская свинка в течение нескольких десятилетий использовалась в испытаниях сенсибилизирующего действия. Были разработаны два типа тестов: адъювантные тесты, в которых сенсибилизация инициируется введением полного адъюванта Фрейнда (ПАФ), и неадъювантные тесты. До недавнего времени было рекомендовано использование четырех адъювантных и трех неадъювантных тестов. В настоящее время предпочтение отдается Максимизационному тесту на морских свинках (GPMT) Магнуссона и Клигмана, который является адъювантным, и неадъювантному тесту Бюхлера. Однако при определенных обстоятельствах для получения необходимой информации о сенсибилизации использование других методов также признается возможным.

Иммунная система мыши была исследована более подробно, чем иммунная система морской свинки. Были разработаны модели для оценки сенсибилизационного потенциала на мышах, обладающие рядом преимуществ, в частности, возможностью объективной оценки конечного результата испытания, короткой продолжительностью и минимальной процедурой обработки животных. Тест на отек уха мыши (MEST) и метод локальных лимфатических узлов (LLNA) считаются перспективными. Оба метода прошли проверку в разных лабораториях, в результате было доказано, что с их помощью могут выявляться умеренные и сильные сенсибилизаторы. Методы LLNA или MEST могут использоваться в качестве первого этапа оценки сенсибилизационного потенциала. Если в обоих испытаниях получен положительный результат, исследуемое вещество может быть признано потенциальным сенсибилизатором и для него не потребуется проведение дальнейшего испытания на морских свинках. Однако, если в LLNA или MEST получают отрицательный результат, испытания на морских свинках (GPMT или тест Бюхлера) должны проводиться с использованием процедуры, приведенной в данном стандарте.

     1 Область применения

Настоящий стандарт закрепляет порядок проведения испытаний кожной сенсибилизации.

     2 Термины и определения

В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями:

2.1 индукционная экспозиция (induction exposure): Экспериментальное воздействие на объект исследуемым веществом с расчетом вызвать сверхчувствительное состояние.

2.2 индукционный период (Induction period): Период, составляющий минимум неделю после индуктивной экспозиции, во время которого может развиваться сверхчувствительное состояние.

2.3 кожная сенсибилизация (аллергический дерматит) (skin sensitisation): Иммунологически опосредованная кожная реакция на вещество. У человека реакции могут проявляться в виде зуда, эритемы, отека, папул, нарывов, волдырей или их комбинации. У животных реакции могут отличаться или наблюдаться только эритема или отек.

2.4 провокационная экспозиция (challenge exposure): Следующее за индуктивным периодом экспериментальное воздействие исследуемым веществом на объект, который ранее подвергался воздействию данным веществом для определения, реагирует ли объект сверхчувствительным образом.

     3 Принцип метода испытания

Обычно, экспериментальные животные подвергаются воздействию исследуемого вещества путем подкожной инъекции и/или накожного нанесения (индукционная экспозиция). Животные обрабатываются провокационной дозой, в течение 10-14 дней (индукционный период) может развиться иммунная реакция. Кожная реакция на провокационную дозу у подопытного животного сравнивается с реакцией у животных, которые подвергались фиктивному воздействию в индукционный период и получили провокационную дозу вещества.

     4 Подготовка

4.1 Пол животных

Используются взрослые здоровые молодые мужские особи и/или женские особи, нерожавшие или небеременные.

4.2 Условия содержания и кормления

Температура лабораторной комнаты должна составлять (20±3)°С, относительная влажность - от 30% до 70%. Используется искусственное освещение в последовательности: 12 часов - свет, 12 часов - темнота. При кормлении может применяться стандартная лабораторная диета с неограниченным количеством питьевой воды. Очень важно, чтобы животные получали необходимое количество аскорбиновой кислоты

4.3 Подготовка животных

Акклиматизация к лабораторным условиям осуществляется в течение не менее 5 дней до начала испытания. Перед испытанием животных произвольно распределяют в тестовые группы. В зависимости от метода испытания для удаления шерсти используется срезание, бритье или химическая депиляция. Шерсть удаляют аккуратно, избегая повреждений кожного покрова. Животных взвешивают до начала и в конце испытания.

4.4 Проверка на достоверность

Чувствительность и надежность используемой экспериментальной техники должны оцениваться каждые шесть месяцев с помощью стандартных веществ, обладающих легким и умеренным сенсибилизирующим действием.

В правильно проведенном испытании для легких/умеренных сенсибилизаторов должны наблюдаться отклики: минимум 30% для адъювантного теста и не менее 15% для неадъювантного. В качестве стандартных веществ предпочтительно использовать гексилциннамальдегид (CAS N 101-86-0), меркаптобензотиазол (CAS N 149-30-4) и бензокаин (CAS N 94-09-7). При определенных обстоятельствах могут применяться другие контрольные вещества, удовлетворяющие приведенным критериям, с соответствующим обоснованием.

4.5 Удаление исследуемого вещества

Для удаления исследуемого вещества используют воду или растворитель, не влияющий на полученную реакцию и целостность кожного покрова.

     5 Процедура испытаний

5.1 Максимизационный тест на морских свинках (GPMT)
     

    5.1.1 Количество животных

Группа, подвергающаяся воздействию, должна содержать как минимум 10 животных, контрольная группа - 5. При использовании менее 20 тестовых и 10 контрольных морских свинок невозможно сделать вывод о том, является ли вещество сенсибилизатором, поэтому строго рекомендуется исследование дополнительных животных для получения как минимум 20 тестовых и 10 контрольных животных.

5.1.2 Уровни доз

Концентрация исследуемого вещества для индукционной экспозиции должна быть хорошо физиологически переносима и вызывать легкое/умеренное раздражение кожи. Концентрация в провокационной экспозиции не должна вызывать раздражение. Подходящие концентрации должны быть определены в предварительном испытании на 2-3 животных, если другая информация отсутствует. Для этой цели предпочтение отдают ПАФ-обработанным животным.

5.1.3 Индукционная экспозиция: подкожные инъекции

День 0 - исследуемая группа

Три пары подкожных инъекций объемом 0,1 мл должны быть введены в плечевую область, очищенную от шерсти таким образом, чтобы инъекции были по обе стороны срединной линии:

инъекция 1 - смесь 1:1 (по объему) ПАФ/вода или физиологический раствор;

инъекция 2 - исследуемое вещество в подходящем растворителе в выбранной концентрации;

инъекция 3 - исследуемое вещество в выбранной концентрации в смеси 1:1 (по объему) ПАФ/вода или физиологический раствор.

В инъекции 3 растворимые в воде вещества до смешивания с ПАФ растворяют в воде. Жирорастворимые или нерастворимые вещества до перемешивания с водой растворяют в ПАФ. Конечная концентрация исследуемого вещества должна быть равной концентрации в инъекции 2.

Инъекции 1 и 2 вводят близко друг другу и к голове животного, в то время как инъекцию 3 вводят ближе к хвостовой части тестовой области.

День 0 - контрольная группа

Три пары подкожных инъекций объемом 0,1 мл вводят в одно и то же место животным, не подвергшимся обработке:

Инъекция 1 - смесь 1:1 (по объему) ПАФ/вода или физиологический раствор;

Инъекция 2 - неразбавленный растворитель;

Инъекция 3 - 50% растворителя в смеси 1:1 (по объему) ПАФ/вода или физиологический раствор.

5.1.4 Индукционная экспозиция: местное нанесение

День 5-7 - тестовая и контрольная группы

Примерно за 24 часа до нанесения вещества, если вещество не является раздражающим для кожи, тестовая область после стрижки или бритья обрабатывается 0,5 мл 50% натрийлаурилсульфатом в вазелине для того, чтобы вызвать местное раздражение.

День 6-8 - тестовая группа