ГОСТ 34176-2017 Препараты ферментные. Методы определения ферментативной активности эндо-бета-глюканазы (с Поправкой)

     5 Метод определения ферментативной активности эндо--глюканазы с использованием капиллярного вискозиметра Оствальда

5.1 Сущность метода

Метод определения ферментативной активности эндо--глюканазы с использованием вискозиметра Оствальда основан на количественном определении снижения относительной вязкости (повышения текучести) субстрата - раствора -глюкана - в результате деградации его под действием эндоглюканаз. Относительную вязкость (текучесть) определяют как отношение вязкости гидролизата субстрата к вязкости буферного раствора при той же температуре.

За единицу активности принимают такое количество фермента, которое в стандартных условиях (гидролиз в течение 10 мин при температуре 30°С) приводит к увеличению величины относительной текучести субстрата, равной 1 мин (ед. ГлА).

5.2 Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы, посуда и реактивы

5.2.1 Для определения ферментативной активности эндо--глюканазы применяют следующие средства измерений и вспомогательные устройства:

- весы неавтоматического действия высокого класса точности по ГОСТ OIML R 76-1 с пределами допускаемой погрешности не более ±0,001 г;

- pH-метр или универсальный иономер с диапазоном измерения от 0 до 14 ед. pH с погрешностью измерения не более ±0,1 ед. pH;

- секундомеры с емкостью шкалы счетчика 1 мин, ценой деления 1 с и погрешностью не более ±1,5 с;

- сито с размером диаметра ячеек не более 1 мм;

- баню водяную лабораторную из прозрачного материала, обеспечивающую поддержание температуры нагревания 30°С с допускаемой погрешностью регулирования температуры не более ±0,1°С;

- баню водяную лабораторную, обеспечивающую температуру нагревания до 100°С с допускаемой погрешностью регулирования температуры не более ±1,0°С;

- вискозиметр Оствальда с размером диаметра капилляра 0,73 мм по ГОСТ 10028;

- измельчитель-гомогенизатор лабораторный или механическую мельницу, обеспечивающую размалывание анализируемой пробы ферментного препарата до полного ее прохода через сито;

- мешалку магнитную любой марки, которая обеспечивает скорость вращения до 800 мин;

- центрифугу лабораторную любого типа, которая обеспечивает скорость вращения не менее 4000 мин;

- холодильник бытовой с рабочим диапазоном температур от 2°С до 8°С.

(Поправка. ИУС N 12-2019).

5.2.2 Для определения ферментативной активности эндо--глюканазы применяют следующие лабораторную посуду и материалы:

- воронки ВФ-1(2)-75-ПОР 500 ТХС по ГОСТ 25336;

- колбы конические Кн-1-25(100,500,1000)-14/23 ТС по ГОСТ 25336;

- колбы мерные 1(2)-25(50,100,200,250,300,500,1000)-2 по ГОСТ 1770;

- пипетки стеклянные по ГОСТ 29227;

- пипетки автоматические вместимостью от 0,1 до 5,0 см с наконечниками;

- стаканчики для взвешивания (бюксы) СВ 19/9 и 24/10 по ГОСТ 25336;

- цилиндры 1-10(50,100,500)-1 по ГОСТ 1770;

- ступка и пестик по ГОСТ 9147.

5.2.3 При определении ферментативной активности -глюканазы применяют следующие реактивы:

- -глюкан из ячменя с содержанием основного вещества не менее 95%, (например, Sigma, кат. N G6517*);