ГОСТ 32435-2013

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

МЕТОДЫ ИСПЫТАНИЯ ПО ВОЗДЕЙСТВИЮ ХИМИЧЕСКОЙ ПРОДУКЦИИ НА ОРГАНИЗМ ЧЕЛОВЕКА

Кожно-резорбтивное действие: метод in vitro

Testmethods for chemicals of health hazard. Skin absorption: in vitro method

     

МКС 71.040.50

Дата введения 2014-08-01

Предисловие

Цели, основные принципы и общие правила проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены"

Сведения о стандарте

1 ПОДГОТОВЛЕН Федеральным бюджетным учреждением здравоохранения "Российский регистр потенциально опасных химических и биологических веществ" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФБУЗ "Российский регистр потенциально опасных химических и биологических веществ" Роспотребнадзора), Федеральным государственным унитарным предприятием "Всероссийский научно-исследовательский центр стандартизации, информации и сертификации сырья, материалов и веществ" (ФГУП "ВНИЦСМВ") на основе собственного перевода на русский язык англоязычной версии документа, указанного в пункте 5

2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 14 ноября 2013 г. N 44)

За принятие проголосовали:

4  Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 22 ноября 2013 г. N 774-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 32435-2013 веден в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 августа 2014 г.

5 Настоящий стандарт идентичен международному документу OECD, Test N 428:2004* "Кожно-абсорбционное действие: метод in vitro ("Skin Absorption: In Vitro Method", IDT).

________________

* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей. - Примечание изготовителя базы данных.

Наименование настоящего стандарта изменено относительно наименования указанного международного документа для приведения в соответствие с ГОСТ 1.5 (подраздел 3.6)

6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

7 ПЕРЕИЗДАНИЕ. Апрель 2019 г.

     Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта и изменений к нему на территории указанных выше государств публикуется в указателях национальных стандартов, издаваемых в этих государствах, а также в сети Интернет на сайтах соответствующих национальных органов по стандартизации.
     
     В случае пересмотра, изменения или отмены настоящего стандарта соответствующая информация будет опубликована на официальном интернет-сайте Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации в каталоге "Межгосударственные стандарты"

Введение

Данный экспериментальный метод был разработан для получения информации об абсорбции исследуемого вещества, нанесенного на удаленную кожу. Исследование может проводиться в сочетании с исследованием кожно-резорбтивного действия in vivo по ГОСТ 32371 или отдельно. При подготовке исследования, основанного на данной методике, рекомендуется использовать [1].

Методы для оценки способности химических веществ проникать через кожу делятся на две категории: in vivo и in vitro. В последнее время разработаны методы in vitro, которые описаны в Руководящем документе OECD [2]. Руководящий документ OECD [2] позволяет выбрать наиболее подходящий метод: in vivo либо in vitro.

Методы in vitro оценивают диффузию химических веществ в кожу и через нее, и могут использовать нежизнеспособную кожу только для измерения диффузии, или свежую метаболически активную кожу для одновременного измерения диффузии и кожного метаболизма. Такие методы нашли широкое применение для сравнительной оценки наличия вещества в коже и проницаемости различных препаратов через нее, а также могут обеспечивать модели для оценки перкутанной абсорбции у людей.

Методы in vitro могут применяться во всех ситуациях и для всех классов химических веществ. Методы in vitro можно использовать для начального количественного определения проницаемости кожи. Данный метод содержит основные принципы для определения кожно-резорбтивного действия и наличия исследуемого вещества в удаленной коже. В исследовании может использоваться кожа многих видов млекопитающих, в том числе и кожа человека. Проницаемость кожи после отделения ее от тела поддерживается за счет основного диффузионного барьера нежизнеспособной роговой оболочки, в которой активное прохождение вещества через кожу не было зарегистрировано.

     1 Область применения

Настоящий стандарт устанавливает процедуру испытания кожно-резорбтивного действия химической продукции методом in vitro.

     2 Термины и определения

В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями:

2.1 исследуемое вещество: Материал, чьи абсорбционные характеристики должны быть изучены. В идеальном случае, вещество должно быть с радиоактивной меткой.

2.2 непоглощенная доза (Unabsorbed dose): Вещество, смытое с поверхности кожи после экспозиции или присутствующее на негерметичной повязке, а также количество вещества, которое испарилось с кожи во время экспозиции.

2.3 поглощенная доза (in vitro) (Absorbed dose): Масса испытуемого вещества, достигшая в течение определенного времени приемного раствора или кровотока.

2.4 поглощаемая доза (in vitro) (The absorbable dose): Вещество, присутствующее на или в коже после промывки.

     3 Принцип метода испытаний

Исследуемое вещество, возможно с радиоактивной меткой, наносят на поверхность кожного образца, разделяющего две камеры диффузионной ячейки (клетки). Вещество оставляют на коже на определенное время при определенных условиях, до удаления вещества с использованием соответствующей процедуры очистки. Приемную жидкость собирают в различные периоды времени в течение эксперимента и анализируют на присутствие вещества и/или его метаболитов.

При использовании метаболически активных систем метаболиты исследуемых веществ следует анализировать соответствующими методами. По окончании эксперимента, при необходимости, количественно оценивают распределение исследуемого вещества и его метаболитов.

При соответствующих условиях, рассмотренных в данной методике и руководящем документе [2], абсорбцию исследуемого вещества в течение данного периода времени измеряют путем анализа приемного раствора и обработанной кожи.

Исследуемое вещество, оставшееся на коже, рассматривают, как абсорбированное, если только не показано, что абсорбция может определяться только по величинам приемного раствора. Анализ других компонентов (вещество, смытое с кожи или оставшееся в кожных слоях) позволяет проводить дальнейшую оценку данных, включая полное распределение и процентное содержание исследуемого вещества.

Для правильной постановки и достоверности тестовой системы в испытательной лаборатории, результаты для соответствующих контрольных веществ должны быть доступны и адекватны данным, опубликованным в литературе по использованию этого метода. Указанное требование может быть удовлетворено тестированием контрольного вещества (предпочтительно с липофильностью, близкой к исследуемому веществу) параллельно с исследуемым веществом или путем сравнения полученных ранее данных для ряда контрольных веществ с различной липофильностью (например, кофеин, бензойная кислота или тестостерон).

     4 Описание метода испытаний

4.1 Диффузионная ячейка

Диффузионная ячейка состоит из донорской камеры и приемной камеры, между которыми помещается кожа (пример типичного устройства приведен на рисунке 1).

А - фильтр из активированного угля (для летучих исследуемых веществ);

Б - донорская камера ячейки;

В - кожная оболочка, 2,54 см;

Г - поддерживающая сетка;

Д - стеклянная диффузионная ячейка;

Е - магнитный вращающийся стержень;

Ж - приемная камера/раствор с температурой (32±1)°С, поддерживаемой с помощью водяной бани;

З - автоматический пробоотборник, запрограммированный для отбора проб в определенное время; пипетка/шприц для отбора проб в люминесцентные или ВЭЖХ сосуды; объем, поддерживаемый путем добавления свежего приемного раствора.

Рисунок 1 - Пример типичного устройства статической диффузионной ячейки для проведения исследований перкутанной абсорбции in vitro

Ячейка должна обеспечивать герметичность вокруг кожи, способствовать легкому приготовлению образцов и хорошему перемешиванию приемного раствора в контакте с обратной стороной кожи, оптимальный температурный контроль ячейки и ее содержимого. Для проведения эксперимента подходят как статические, так и проточные диффузионные ячейки.

Донорские ячейки оставляют открытыми во время экспозиции определенной дозой экспериментальной пробы. Для неопределенных видов и некоторых сценариев применения для определенных доз ячейки могут быть закрыты.

4.2 Приемный раствор

Предпочтительно использовать физиологически проводящий приемный раствор, однако, могут использоваться и другие растворы при условии, что их применение обосновано.

Необходимо знать точный состав приемного раствора.

Исследуемое вещество должно быть растворимо в приемном растворе таким образом, чтобы это не мешало абсорбции.

Приемный раствор не должен оказывать влияния на целостность кожного образца.

В проточных системах скорость потока не должна мешать диффузии исследуемого вещества в приемный раствор. В статических системах приемный раствор должен постоянно перемешиваться и регулярно обновляться. При изучении метаболизма приемный раствор должен поддерживать жизнеспособность кожи на протяжении всего эксперимента.

4.3 Подготовка кожи

В эксперименте может использоваться кожа человека или животных. Предпочтительно использовать жизнеспособную кожу, нежизнеспособная кожа также может использоваться при условии, что подтверждена ее целостность. Пригодными для применения являются, как эпидермальные оболочки (разделенные обработкой энзимами, теплом или химическим способом), так и расщепленные кожные образцы (обычно от 200 до 400 мкм толщиной), подготовленные с помощью дерматома. Может использоваться кожа обычной толщины, но избыточной толщины кожи (приблизительно >1 мм) следует избегать, если только это не является специальным требованием для определения вещества в слоях кожи.

Подбор видов, анатомическое место и техника препарирования должны быть обоснованы. Необходимо получение достоверных данных, как минимум, четырех воспроизведений для каждой экспериментальной пробы.

4.4 Целостность кожного образца

Результатом неправильной подготовки может явиться повреждение роговой оболочки, поэтому целостность подготовленной кожи должна быть проверена. При исследовании кожного метаболизма свежесрезанная кожа должна быть использована, как можно быстрее при условиях, поддерживающих метаболическую активность. Свежесрезанная кожа должна быть использована в течение 24 часов, но приемлемый период хранения кожи может изменяться в зависимости от системы энзимов, вовлеченных в метаболизм, и температур хранения. Когда пробы кожи хранятся до использования, необходимо убедиться, что поддерживается барьерная функция.

4.5 Подготовка исследуемого вещества

Проба исследуемого вещества (например, чистый, разбавленный или смешанный материал, содержащий исследуемое вещество, который наносится на кожу) должна быть подготовлена в той же форме (или в форме соответствующего суррогата), в которой человек или другие потенциальные целевые виды могут подвергаться ее воздействию. Любые другие формы используемой пробы должны быть обоснованы.

4.6 Состав и концентрации исследуемого вещества

Обычно используется более одной концентрации исследуемого вещества в диапазоне реальных воздействий на человека. Также должен быть рассмотрен экспериментальный диапазон типичных составов.

4.7 Нанесение вещества на кожу

Нанесение вещества, имитирующее воздействие на человека, составляет от 1 до 5 мг/см кожи для твердых веществ и до 10 мкл/см для жидкостей. Количество должно быть обосновано ожидаемыми условиями проведения испытания, целями исследования и физическими характеристиками пробы. Например, нанесения на кожу могут быть неопределенными, в случае, если используются большие количества вещества на единицу поверхности.

4.8 Температура